產(chǎn)品名稱：猴腦鈉素(BNP)ELISA試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中指標(biāo)水平。用純化的指標(biāo)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入指標(biāo)，再與HRP標(biāo)記的-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過 洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中指標(biāo)濃度。

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

猴腦鈉素(BNP)ELISA試劑盒操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

ELISA的檢測目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃

（２）貼壁細(xì)胞的傳代

當(dāng)我們在準(zhǔn)備給貼壁細(xì)胞進(jìn)行傳代的時(shí)候應(yīng)該確認(rèn)以下兩點(diǎn)：1.先把細(xì)胞從細(xì)胞培養(yǎng)箱中拿出，放在顯微鏡下觀察，確保細(xì)胞

狀態(tài)良好，沒有污染；2.觀察細(xì)胞的匯合度達(dá)到70%-90%，細(xì)胞匯合度太低或者太高時(shí)對細(xì)胞進(jìn)行傳代均不利于細(xì)胞生長。

只有滿足這兩點(diǎn)基本條件，我們才能給細(xì)胞傳代。給細(xì)胞傳代時(shí)，首先我們棄去培養(yǎng)基，用pH=7.4的無菌的磷酸緩沖鹽溶液

（PBS）清洗細(xì)胞2-3次，動(dòng)作要輕柔防止細(xì)胞脫落。清洗完細(xì)胞后再加入終濃度為0.25%的消化液消化細(xì)胞，

消化過程中把細(xì)胞放在顯微鏡下觀察，直到細(xì)胞被消化成一個(gè)一個(gè)單獨(dú)的小圓球時(shí)加入培養(yǎng)基終止細(xì)胞消化，

消化時(shí)間要把握好，消化時(shí)間太短細(xì)胞沒有消化下來，時(shí)間太長則會(huì)影響細(xì)胞活性。消化下來的細(xì)胞吹打混勻后以1:3-5的比例

分裝到新的培養(yǎng)器皿中再加入足量的培養(yǎng)基繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個(gè)月更多產(chǎn)品詳情聯(lián)系我們

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