細胞名稱：小鼠黑色素瘤細胞B16-OVAATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)加倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4360C人卵巢癌細胞Caov-3

YS4361C牛腎細胞MDBK (NBL-1)

YS4362C人多發(fā)性骨髓瘤細胞OPM-2

YS4363C小鼠胰腺癌細胞Panc02

YS4364C人B淋巴瘤細胞Farage

YS4365C結(jié)直腸腺癌細胞COLO201

YS4366C小細胞肺癌細胞NCIH526

YS4367C乳腺癌細胞HCC70

YS4368C人卵巢癌細胞IGR-OV1

YS4369C人神經(jīng)母細胞瘤細胞BE(2)-M17

YS4370C小鼠肝癌細胞Hepa 1-6

YS4371C結(jié)腸癌細胞細胞COLO 678

YS4372C大鼠雪旺細胞RSC96

YS4373C小鼠前胃癌細胞 MFCMFC

YS4374C人紅白血病細胞 KASUMI-1

YS4375C惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞NK92MI （少量細胞表達CD3）

YS4376C人神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤細胞U-251MG

YS4377C人絨毛膜癌細胞JEG-3

YS4378C人咽鱗癌細胞FaDu

YS4379C人彌漫性組織淋巴瘤細胞SU-DHL-2

YS4380C人正常卵巢上皮細胞IOSE-80

YS4381C人膀胱移行細胞癌細胞T24

YS4382C非小細胞肺癌細胞NCIH522

YS4383C人咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細胞Detroit562

YS4384C惡性多發(fā)性畸胎瘤細胞NTERA-2

YS4385C急性髓細胞樣白血病MOLM13

YS4386C人肺腺癌細胞 NCI-H2009

YS4387C胃癌細胞SNU5

YS4388C慢性髓細胞樣白血病細胞JVM3

YS4389C人正常胰腺導管細胞hTERT-HPNE

YS4390C人胰腺癌細胞Capan-1

YS4391C小鼠B細胞淋巴瘤A20

YS4392C人胰腺癌細胞HPAF-Ⅱ

YS4393C人胰腺癌細胞AsPC-1

YS4394C人胰腺導管癌細胞CFPAC-1

YS4395C人肝母細胞瘤細胞HuH6

YS4396C人子宮內(nèi)膜癌細胞HEC-1-B

YS4397C卵巢上皮性腫瘤細胞OAW28

YS4398C人非小細胞肺癌細胞HCC827

YS4399C人結(jié)腸腺癌細胞SW1116

YS4400C人前列腺癌細胞LNCAP

YS4401C人膀胱移行細胞乳頭瘤細胞RT4

YS4402C人急性T淋巴細胞白血病細胞Jurkat, Clone E6-1

YS4403C人甲狀腺乳頭狀細胞TPC-1

YS4404C非小細胞肺癌腺癌細胞NCIH1993

YS4405C人鼻咽癌細胞C666-1

YS4406C人子宮鱗癌細胞（高分化）HCC 94

YS4407C人肝癌細胞SNU-398

YS4408C人食管鱗癌細胞KYSE-150

YS4409C滑膜肉瘤細胞SW982

YS4410C人骨肉瘤細胞SW 1353

YS4411C肝癌細胞SNU761

YS4412C大細胞淋巴瘤SUDHL10

YS4413CB細胞淋巴瘤OCILy19

YS4414CB細胞淋巴瘤U2932

YS4415C外周血B淋巴瘤細胞IM9

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