細(xì)胞名稱：HMSC-bm人骨髓血間充質(zhì)干細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)的一大優(yōu)勢在于能夠控制細(xì)胞繁殖的物理化學(xué)環(huán)境（即溫度、pH值、滲透壓、O2和CO2張力）和生理環(huán)境（即激素和營養(yǎng)濃度）。除溫度外，培養(yǎng)環(huán)境由生長培養(yǎng)基控制。雖然細(xì)胞培養(yǎng)的生理環(huán)境不如其物理化學(xué)環(huán)境明確，但是通過更好地了解血清成分、確定增殖所需的生長因子以及更好地了解培養(yǎng)過程中的細(xì)胞微環(huán)境（即細(xì)胞間相互作用、氣體擴散、細(xì)胞-基質(zhì)相互作用），現(xiàn)在可以采用無血清培養(yǎng)基進(jìn)行一些細(xì)胞系的培養(yǎng)。

YS2390C人小腸癌細(xì)胞系

YS2391C SJCRH30人骨髓橫紋肌肉癌細(xì)胞

YS2392C 人腺癌細(xì)胞系

YS2393C Hela細(xì)胞耐藥亞株

YS2394C COC1細(xì)胞耐藥亞株

YS2395C 人原胚腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞系

YS2396C 人胃癌細(xì)胞系

YS2397C 人胸腺激酶缺陷細(xì)胞系

YS2398C Burkitts淋巴瘤細(xì)胞系

YS2399C A-673人橫紋肌肉瘤細(xì)胞

YS2400C 膀胱癌細(xì)胞

YS2401C 急性骨髓性白血病細(xì)胞

YS2402C SV－40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞

YS2403C A2058人皮膚癌細(xì)胞

YS2404C 人乳腺癌細(xì)胞BcaP-37（暫不提供）

YS2405C 人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS2406C T-24人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞

YS2407C EB-3人淋巴樣Burkitt淋巴瘤細(xì)胞

YS2408C L-CELLSL細(xì)胞

YS2409C 人肝癌細(xì)胞

YS2410C 表達(dá)HBV病毒的人肝細(xì)胞

YS2411C 人口腔癌細(xì)胞

YS2412C B淋巴細(xì)胞

YS2413C 人小細(xì)胞肺癌

YS2414C 人前列腺正常細(xì)胞

YS2415C 上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌

YS2416C 宮頸癌細(xì)胞

YS2417C 人血液白血病細(xì)胞

YS2418C 急性淋巴細(xì)胞

YS2419C 人外周血淋巴細(xì)胞

YS2420C 胸膜積液B淋巴細(xì)胞

YS2421C 人舌鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞

YS2422C 人骨肉瘤細(xì)胞

YS2423C 人乳腺癌細(xì)胞

YS2424C 人骨髓瘤細(xì)胞株

YS2425C 人外周淋巴細(xì)胞

YS2426C EB病毒感染的人外周淋巴細(xì)胞

YS2427C 人胚肺成纖維細(xì)胞

YS2428C 人肺腺癌細(xì)胞

YS2429C 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞

YS2430C 人黑色素瘤細(xì)胞

YS2431C 人肺鱗癌細(xì)胞

YS2432C 人B淋巴瘤細(xì)胞系

YS2433C 人前列腺癌細(xì)胞

YS2434C 人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移系

YS2435C 男性正常龜頭細(xì)胞系

YS2436C HUMSC臍帶血來源人MSC細(xì)胞人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞

YS2437C H9人類胚胎干細(xì)胞

YS2438C 人子宮異位內(nèi)膜上皮細(xì)胞細(xì)胞系

YS2439C BG01V人類胚胎干細(xì)胞

YS2440C DYR0100人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞

YS2441C DYP0530人誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞

YS2442C TTA1人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2443C HFF人包皮成纖維細(xì)胞

YS2444C HN4人類胚胎干細(xì)胞

YS2445C B-CPAP人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2446C H1人類胚胎干細(xì)胞

YS2447C HMSC-bm骨髓來源人MSC細(xì)胞人骨髓血間充質(zhì)干細(xì)胞

YS2448C HMSC-ad脂肪來源人MSC細(xì)胞人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

YS2449C CAL-62人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2450C HK-2人腎上皮細(xì)胞

YS2451C HTh-7人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2452C Hth83人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2453C KHM-5M人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2454C KMH-2人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2455C Ocut-2C人甲狀腺癌細(xì)胞

YS2456C MDA-MB-436人乳腺腺癌細(xì)胞

YS2457C NIH:OVCAR-3人卵巢癌細(xì)胞

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