傳 代

1一般在復(fù)蘇后第7~10天傳代，之后常規(guī)傳代為6-7天一次。

2吸除廢液。用DPBS（不含鈣鎂離子）輕輕沖洗一遍。

3加入2~3ml的1mg/ml的干細(xì)胞專用消化液至培養(yǎng)瓶，輕輕晃動(dòng)，使之覆蓋底面，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)消化細(xì)胞。

4在顯微鏡下觀察，直至克隆脫落（一般需要3~6min）。

 5將帶有脫落克隆的消化液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，放置一會(huì)，待克隆自然沉降后將上層吸除，加入H9培養(yǎng)液3ml輕輕混勻，

放置一會(huì)，待克隆自然沉降后將上層培養(yǎng)液吸除，重復(fù)一次（即H9培養(yǎng)液漂洗2遍，沉降后吸掉上清）。

6加入H9培養(yǎng)液3ml，用1ml移液器吹打2-3次，將克隆塊吹散成大小為原來(lái)的約1/10（若想得到大小較均一的克隆塊，

此時(shí)可將細(xì)胞靜置片刻，待細(xì)胞自然沉降后取懸浮于液體中間層的克隆塊傳代），傳代比例根據(jù)母瓶克隆密度和大小而定，一般1:3~1:5傳代。

7放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

8第二天不換液，第三天起每天換液，換液前顯微鏡下將分化的克隆挑除。

 注意：傳代時(shí)不能吹打過(guò)度，不能吹打成單細(xì)胞，保持細(xì)胞克隆塊狀，傳代后48小時(shí)換液，期間最好不要挪動(dòng)細(xì)胞。每6~7天傳代一次。